ความเสี่ยงที่ซ่อนอยู่ของการยับยั้งบางส่วน: เหตุใดอาหารบางชนิดจึงสามารถปกปิดเชื้อซัลโมเนลลาและเชื้อก่อโรคอื่น ๆ ได้

อะไรเป็นสาเหตุของการตรวจ PCR ที่ให้ผลลบเท็จ?

PCR testingถูกสร้างขึ้นเพื่อความแม่นยำ แต่บางครั้งอาหารเองก็อาจเป็นอุปสรรค ส่วนประกอบต่างๆ เช่น โกโก้ เนยถั่ว เครื่องเทศ และสารประกอบที่ซับซ้อนอื่นๆ มีไขมัน โปรตีน และโพลีฟีนอลที่รบกวนการขยายตัว ทำให้ยากต่อการตรวจหาเชื้อโรค สารเหล่านี้สามารถทำให้สัญญาณ PCR อ่อนลง โดยเฉพาะเมื่อรวมกับการปนเปื้อนในระดับต่ำ เมื่อเกิดเหตุการณ์นี้ขึ้น การทดสอบอาจให้ผลลบแม้ว่าเชื้อโรคยังคงมีอยู่ก็ตาม

สำหรับผู้ผลิตที่จัดการกับอาหารพร้อมรับประทานหรืออาหารที่มีความชื้นต่ำบางประเภท ความเสี่ยงที่เงียบนี้มีความสำคัญ แม้แต่เพียงหนึ่งเดียว Salmonellaเซลล์ในผลิตภัณฑ์แห้งสามารถคงอยู่ได้นานหลายเดือน สร้างปัญหาในกระบวนการผลิตต่อไปได้นานหลังจากทดสอบครั้งแรก. สิ่งนี้ก่อให้เกิดคำถามสำคัญสำหรับโปรแกรมความปลอดภัยอาหารใด ๆ:

คุณเชื่อในผลลัพธ์เชิงลบของคุณหรือไม่ และควรทำอย่างไรแทน?

การทำความเข้าใจการยับยั้งบางส่วน

การยับยั้ง PCR เกิดขึ้นเมื่อสารในตัวอย่างอาหารรบกวนการสกัดหรือการขยายตัวของ DNA สารประกอบเหล่านี้สามารถจับกับหรือทำลาย DNA, ขัดขวางเอนไซม์โพลีเมอเรส, เปลี่ยนแปลงความพร้อมของไอออน, หรือป้องกันการสกัดที่สม่ำเสมอ เมื่อเกิดเหตุการณ์นี้ ปฏิกิริยายังคงดำเนินต่อไป แต่ปริมาณ DNA ที่สามารถตรวจพบได้จะลดลง สัญญาณจะปรากฏอ่อนกว่าหรือช้ากว่าที่คาดไว้ ซึ่งเพิ่มความเสี่ยงในการพลาดการปนเปื้อนที่มีอยู่จริง

ผลกระทบนี้อาจไม่ชัดเจนแต่มีความสำคัญ เนื่องจากวิธีการทดสอบอาจไม่ล้มเหลวอย่างสิ้นเชิง อย่างไรก็ตาม การปนเปื้อนที่อาจอยู่ในระดับใกล้เคียงอาจไม่สามารถตรวจพบได้ anymore. นี่คือหนึ่งในสาเหตุที่พบได้บ่อยที่สุดของผลลบเทียมในอาหารที่มีความซับซ้อนหรือมีความชื้นต่ำ.

อาหารใดบ้างที่มักทำให้เกิดการยับยั้ง?

อาหารบางชนิดมีสารยับยั้งตามธรรมชาติเนื่องจากส่วนประกอบของมัน ตัวอย่างเช่น cocoa and chocolateมีไขมันและโพลีฟีนอลในระดับสูง เนยถั่วและเนยถั่วลิสงมีไขมันเข้มข้นซึ่งทำให้การสกัดซับซ้อนขึ้น เครื่องเทศและสมุนไพรมีโพลีแซคคาไรด์ แคลเซียม และน้ำมันหอมระเหยซึ่งทำให้การขยายตัวช้าลงหรือหยุดชะงัก อาหารที่มีโปรตีนสูงสามารถจับกับแมกนีเซียมซึ่งจำเป็นสำหรับเอนไซม์ PCR ในการทำงานอย่างถูกต้อง

แม้จะมีความแตกต่างกัน แต่เมทริกซ์เหล่านี้ก็สร้างความท้าทายเดียวกัน: ประสิทธิภาพการขยายตัวลดลง และโอกาสที่จะไม่ตรวจพบการปนเปื้อนในระดับต่ำเพิ่มขึ้น

การยับยั้งบางส่วนมีลักษณะอย่างไรในทางปฏิบัติ?

เหตุการณ์การยับยั้งส่วนใหญ่เป็นเพียงบางส่วนมากกว่าทั้งหมด กราฟ PCR อาจยังคงปรากฏอยู่ แต่การปนเปื้อนที่อยู่ในระดับใกล้เคียงอาจลดลงต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับในเมทริกซ์ที่ท้าทาย ในกรณีเหล่านี้ ผลลัพธ์อาจดูสะอาดแม้ว่าจะมีเชื้อโรคในระดับต่ำหลงเหลืออยู่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อระดับการปนเปื้อนอยู่ในระดับต่ำมากอยู่แล้ว

ทำไมอาหารที่มีความชื้นต่ำจึงสร้างความเสี่ยงเพิ่มเติม?

อาหารที่มีความชื้นต่ำ เช่น โกโก้ เนยถั่ว ช็อกโกแลต และผงต่าง ๆ มีความเกี่ยวข้องกับเชื้อซัลโมเนลลาเป็นเวลานานแล้ว แต่พวกมันยังมีความท้าทายทางชีวภาพเพิ่มเติมอีกด้วย

สภาพแวดล้อมที่แห้งก่อให้เกิดเซลล์แบคทีเรียที่เครียดหรือบาดเจ็บซึ่งยังคงสามารถก่อให้เกิดโรคได้ เซลล์เหล่านี้ฟื้นตัวช้าในระหว่างการเพิ่มปริมาณ ซึ่งหมายความว่าอาจไม่สามารถตรวจพบได้ในระยะเวลาที่การทดสอบ PCR และซอฟต์แวร์ได้รับการออกแบบไว้ การปนเปื้อนในผลิตภัณฑ์เหล่านี้มักมีอยู่ในระดับเศษส่วน บางครั้งอาจต่ำถึงหนึ่งเซลล์ต่อหนึ่งร้อยกรัม เมื่อการขยายตัวถูกยับยั้งอยู่แล้ว เซลล์ที่มีค่าบวกใกล้เคียงขีดจำกัดเหล่านี้จะเป็นกลุ่มแรกที่หายไป

สภาพแวดล้อมที่มีความชื้นต่ำยังเอื้อต่อการอยู่รอดในระยะยาวอีกด้วยเชื้อซัลโมเนลลาสามารถคงสภาพมีชีวิตได้นานหลายเดือนหรือแม้กระทั่งหลายปี ซึ่งก่อให้เกิดความเสี่ยงตลอดอายุการเก็บรักษาของผลิตภัณฑ์ เมื่อเซลล์ที่อยู่ในภาวะเครียด ระดับการปนเปื้อนต่ำ และการยับยั้งเกิดขึ้นพร้อมกัน ความน่าจะเป็นของการตรวจไม่พบเชื้อ (ผลลบปลอม) จะเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ

อะไรคือปัญหาการเจือจาง?

วิธีทั่วไปวิธีหนึ่งในการเอาชนะผลกระทบของการยับยั้งคือการเจือจางไลเสต DNA ก่อนทำการ PCR การลดความเข้มข้นของสารยับยั้งสามารถปรับปรุงการขยายตัวได้ อย่างไรก็ตาม ขั้นตอนนี้ยังลดความเข้มข้นของ DNA เป้าหมายด้วย การเจือจางหลังการสกัดอาจไม่ได้เป็นส่วนหนึ่งของการตรวจสอบความถูกต้องของวิธี ดังนั้นห้องปฏิบัติการอาจไม่ตั้งใจทำให้เกิดการสูญเสียความไวในวิธีนี้สำหรับเมทริกซ์ที่มีความชื้นต่ำ ซึ่งอาจมีเชื้อซัลโมเนลลาอยู่ในระดับต่ำมากอยู่แล้ว การสูญเสียความไวนี้อาจเพียงพอที่จะเปลี่ยนผลบวกอ่อนเป็นผลลบได้

การเสริมสร้างขั้นที่สองเป็นแนวทางที่ดีกว่าหรือไม่?

ขั้นตอนการเพิ่มความเข้มข้นขั้นที่สองมักเป็นวิธีที่น่าเชื่อถือมากกว่าสำหรับเมทริกซ์ที่ยับยั้งการทำงาน ต่างจากการเจือจางไลเสต การเพิ่มความเข้มข้นขั้นที่สองสามารถเพิ่มจำนวนเซลล์เป้าหมายได้ในขณะที่ลดอิทธิพลของสารยับยั้งไปพร้อมกัน เมื่อวัฒนธรรมเติบโตขึ้น เซลล์ที่เครียดจะฟื้นตัว และสารยับยั้งจะเจือจางลงในปริมาณน้ำซุปเพิ่มเติม ซึ่งช่วยปรับปรุงการตรวจจับโดยรวมโดยไม่ลดความไว

สำหรับอาหารที่ทราบว่าเป็นความท้าทายสำหรับ PCR เช่น โกโก้ ช็อกโกแลต และเนยถั่ว Hygiena® ให้ตัวเลือกการเสริมความเข้มข้นรองที่ได้รับการตรวจสอบแล้วเป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการทำงาน โปรโตคอลเหล่านี้ถูกออกแบบมาเพื่อรักษาประสิทธิภาพของวิธีการ โดยเสนอแนวทางที่สม่ำเสมอและได้รับการตรวจสอบสำหรับเมทริกซ์ที่ท้าทาย

การควบคุมภายในช่วยป้องกันการตรวจไม่พบข้อผิดพลาดได้อย่างไร?

การควบคุมการขยายสัญญาณภายในมีบทบาทสำคัญในการระบุการยับยั้งก่อนที่มันจะนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง Hygienaของ BAX® System Q7และ foodproof®การทดสอบประกอบด้วยตัวควบคุมบวกภายในในทุกปฏิกิริยาเพื่อยืนยันว่าเคมีทำงานตามที่คาดหวังไว้ หากตัวควบคุมภายในไม่ขยายตัว ผลจะถูกทำเครื่องหมายว่าไม่ชัดเจนแทนที่จะเป็นลบ ซึ่งช่วยป้องกันการยับยั้งจากการถูกเข้าใจผิดว่าเป็นลบจริง และช่วย EnSURE ผลลัพธ์สะท้อนถึงสภาพที่แท้จริงของตัวอย่าง

การทดสอบวินิจฉัยที่ตรวจหาเชื้อโรคควรยืนยันด้วยว่าการเกิดปฏิกิริยาเองนั้นทำงานได้ถูกต้อง การควบคุมภายในให้การรับประกันนี้และเพิ่มความมั่นใจในผลการทดสอบที่เป็นลบอย่างแท้จริง

ทำไมการยืนยันจึงมีความสำคัญ?

อาหารแต่ละชนิดมีพฤติกรรมแตกต่างกันระหว่างการทดสอบ ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมการตรวจสอบความถูกต้องที่เฉพาะเจาะจงกับเมทริกซ์จึงมีความจำเป็นอย่างยิ่ง หน่วยงานตรวจสอบความถูกต้องเช่น AOAC, ISO, Health Canada, AFNOR, MicroVal, และ NordVal ต้องการการทดสอบครอบคลุมอาหารหลากหลายประเภทเพื่อ EnSURE ประสิทธิภาพที่เชื่อถือได้ ชุดทดสอบ BAX และ foodproof ของ Hygienaได้รับการตรวจสอบความถูกต้องในเมทริกซ์ที่มีความชื้นต่ำ ไขมันสูง โปรตีนสูง และซับซ้อน เพื่อช่วยให้ห้องปฏิบัติการมั่นใจในผลการตรวจของพวกเขา

ระดับการตรวจสอบนี้มอบความมั่นใจให้กับทีมที่มีคุณภาพและผู้ตรวจสอบว่าผลลัพธ์เชิงลบมีความหมายและไม่ได้เกิดจากการยับยั้งบางส่วน

ขั้นตอนปฏิบัติเพื่อลดความเสี่ยงของการยับยั้ง

การลดการยับยั้งเริ่มต้นด้วยความมั่นใจในวิธีการที่ใช้ ห้องปฏิบัติการควรพึ่งพาการทดสอบที่ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องอย่างสมบูรณ์ซึ่งเหมาะสมกับเมทริกซ์ที่กำลังทดสอบและ EnSURE การควบคุมภายในมีอยู่เพื่อตรวจจับการยับยั้งโดยอัตโนมัติ วิธีการที่มีการเพิ่มความเข้มข้นรองเป็นทางเลือกที่ชาญฉลาดสำหรับเมทริกซ์ที่ทราบว่าเป็นความท้าทายในการสกัดหรือขยายตัวอย่าง การเตรียมตัวอย่างอาจต้องมีการปรับสำหรับอาหารที่มีน้ำมัน ความหนืด หรือเป็นผง

ขั้นตอนเหล่านี้ช่วยเสริมสร้างกระบวนการทำงานโดยรวม และสนับสนุนการตัดสินใจอย่างถูกต้อง

ข้อสรุป

การยับยั้งบางส่วนเป็นปัจจัยที่มองไม่เห็นในการทดสอบเชื้อโรค โดยเฉพาะในอาหารที่ซับซ้อนหรือมีความชื้นต่ำ มันไม่ได้หยุดปฏิกิริยาเคมีเสมอไป แต่สามารถทำให้สัญญาณที่จำเป็นในการตรวจจับการปนเปื้อนในระดับต่ำอ่อนแอลงอย่างเงียบๆ ผ่านวิธีการ PCR ที่ได้รับการตรวจสอบแล้ว การควบคุมภายใน และขั้นตอนการเพิ่มปริมาณที่เฉพาะเจาะจงกับเมทริกซ์ ห้องปฏิบัติการสามารถปรับปรุงความน่าเชื่อถือของผลการทดสอบที่เป็นลบได้

ในการวินิจฉัยระดับโมเลกุล ความแม่นยำเป็นตัวกำหนดทั้งความมั่นใจและความปลอดภัย

เมทริกซ์เหล่านี้มีความท้าทาย และความเสี่ยงเป็นจริง Hygiena ให้บริการการทดสอบที่ได้รับการตรวจสอบแล้วสำหรับระบบ Q7 ของการวิเคราะห์ความเสี่ยงและระบบการวิเคราะห์ความเสี่ยงของอาหารที่ผ่านการรับรอง ( BAX System Q7 and foodproof assays) ซึ่งออกแบบมาเพื่อสนับสนุนการตัดสินใจอย่างถูกต้องสำหรับอาหารที่ยากต่อการวิเคราะห์ เซลล์ที่ถูกกดดัน และการปนเปื้อนในระดับต่ำ

With the right tools, laboratories can trust the results they rely on every day. 

 

คำถามที่พบบ่อย (FAQ)

ถาม: การยับยั้งบางส่วนคืออะไร?
การยับยั้งบางส่วนคือเมื่อส่วนประกอบของอาหารทำให้การขยาย PCR อ่อนแอลงโดยไม่ทำให้เกิดการล้มเหลวของปฏิกิริยาอย่างสมบูรณ์

ถาม: อาหารชนิดใดที่มีแนวโน้มที่จะถูกยับยั้งมากที่สุด?
โกโก้, ช็อกโกแลต, เนยถั่ว, เครื่องเทศ, สมุนไพร, และอาหารที่มีไขมันสูงหรือโปรตีนสูง

ถาม: การเจือจางช่วยแก้ปัญหาการยับยั้งได้หรือไม่?
การเจือจางสามารถลดสารยับยั้งได้ แต่ในขณะเดียวกันอาจลดความไวในการตรวจลงด้วย ซึ่งอาจทำให้ผลบวกที่อยู่ในเกณฑ์ก้ำกึ่งกลายเป็นผลลบได้

ถาม: ทำไมจึงแนะนำให้มีการเสริมคุณค่าขั้นที่สอง?
มันช่วยให้เซลล์ที่เครียดฟื้นตัวและลดผลกระทบของตัวขัดขวางโดยไม่ลดความไว

ถาม: ฉันจะตรวจจับการยับยั้งก่อนที่มันจะก่อให้เกิดข้อผิดพลาดได้อย่างไร?
ใช้การทดสอบที่มีตัวควบคุมการขยายภายในที่สามารถแจ้งเตือนการยับยั้งที่อาจเกิดขึ้นได้