Przeciwciało G12 - często zadawane pytania

Jaką sekwencję peptydową rozpoznaje przeciwciało G12?

Przeciwciało G12 zostało wyhodowane przeciwko wysoce immunotoksycznemu 33-merowemu peptydowi białka α-gliadyny, który wywołuje celiakię (Morón i in., 2008). Dokładniej, region rozpoznawania w obrębie 33-meru to heksameryczny epitop QPQLPY. Ta sekwencja rozpoznawania powtarza się trzykrotnie w obrębie 33-merowego peptydu gliadyny. Przeciwciało G12 rozpoznaje immunotoksyczne prolaminy z pszenicy, jęczmienia, żyta, a także z niektórych odmian owsa (Morón et al., 2008). Przeciwciało G12 jest również zdolne do reagowania z innymi epitopami, które znajdują się w innych toksycznych prolaminach, takich jak QPQLPF, QPQLPL, QPQQPY, QPQQPF (Morón i wsp. 2008; oraz Real i wsp. 2014).

Czy przeciwciało G12 reaguje tylko na 33-mer α-gliadyny?

Nie, nie jest. Przeciwciało G12 może reagować na podobne sekwencje obecne w innych gliadynach (omega, alfa, gamma i beta), a także w gluteninach. Profil rozpoznawania G12 został w dużej mierze scharakteryzowany. (Morón et al., 2008a, Morón et al., 2008b, Real et al., 2014). Istnieją inne peptydy, które mogą reagować z G12, które znajdują się w immunogennych peptydach pszenicy, jęczmienia i żyta: QPQLPY, QPQPY, QPQPF, QPQLPF, QPQLPL, QPELPY.

Czy G12 jest w stanie wykryć gluten w piwie i innych zhydrolizowanych materiałach?

W materiałach zhydrolizowanych, takich jak piwo, względna proporcja reaktywnych peptydów dla pacjentów z celiakią może się różnić ze względu na różnorodność powstałych populacji peptydów po fermentacji. W publikacji sprzed kilku lat (Comino et al., 2012), szeroka gama piw została przeanalizowana za pomocą dwóch różnych metod opartych na przeciwciałach G12 (konkurencyjny test ELISA i test immunologiczny z przepływem bocznym) z podobnymi wynikami. Później (Real et al., 2014) wykazano, że piwo legalnie oznaczone jako bezglutenowe (niewykrywalny poziom glutenu w konkurencyjnym teście ELISA R5) zawierało peptydy glutenowe określone za pomocą testu ELISA G12 i spektrometrii mas, które zidentyfikowały peptydy immunotoksyczne dla pacjentów z celiakią. Wykazano to poprzez wystawienie komórek układu odpornościowego pacjentów z celiakią na działanie tych peptydów i pomiar ich odpowiedzi. W nowszym badaniu (Picariello et al., 2015) przeanalizowano próbki piwa WeissbIer (piwo pszeniczne) i wykryto immunotoksyczne epitopy z G12. Przeanalizowano te piwa z surowicami pacjentów z celiakią jako źródłem przeciwciał antygliadynowych, potwierdzając, że piwo pszeniczne zawierało peptydy reagujące z surowicami pacjentów z celiakią.

Istnieje ponad 1000 peptydów glutenowych znanych jako immunogenne. Czy G12 rozpoznaje je wszystkie?

Wykrycie wszystkich tych peptydów za pomocą jednego przeciwciała jest prawie niemożliwe. Jednak ostatnie badania (Moreno et al., 2016) wykazały, że najbardziej immunogenne peptydy (odpowiedzialne za 80-95% immunoreaktywności komórek T celiakii) reagowały z G12. W przeciwieństwie do tego, szeroko stosowane przeciwciało do wykrywania glutenu, R5, rozpoznało tylko około 25% tych immunogennych peptydów piwa jęczmiennego. Korelacja między reaktywnością G12 a immunogennością komórek T została w dużej mierze zbadana w kilku trudnych do analizy produktach spożywczych, takich jak czyste odmiany owsa lub odmiany jęczmienia (Comino i in., 2011, Comino i in., 2012).

Czy owies jest bezpieczny dla pacjentów z celiakią? Czy są one naprawdę bezglutenowe?

Owies jest często narażony na zanieczyszczenia krzyżowe (na polu i/lub podczas procesu produkcyjnego). Jednakże, nawet jeśli owies został starannie wyhodowany i przetworzony, nie oznacza to, że zawsze jest uważany za żywność bezglutenową. Badanie z 2011 roku (Comino et al., 2011) wykazało, że nie wszystkie odmiany owsa są jednakowe pod względem zawartości peptydów immunogennych glutenu. Wszystkie odmiany owsa zawierają aweninę, ale każda z nich ma inną sekwencję i strukturę, a tylko niektóre z tych odmian mogą stanowić ryzyko dla pacjentów z celiakią. Gluten z odmian owsa został wystawiony na działanie komórek pochodzących od pacjentów z celiakią, a komórki zareagowały odpowiednio; zareagowały tylko na potencjalnie immunotoksyczne odmiany owsa. Dlatego przeciwciało G12 jest najlepszym wyborem dla każdej firmy, która pracuje z bezglutenowym owsem. Inne badania (Real i in., 2012; Comino i in., 2016, Silano i in., 2013) dodatkowo scharakteryzowały różnice między tymi odmianami owsa i ich immunogenność. W każdym przypadku gluten pszenny zawsze wykazywał co najmniej 40-krotnie większą reaktywność na G12 niż najbardziej reaktywna odmiana owsa. Być może tylko najbardziej wrażliwi pacjenci z celiakią mogą być dotknięci najbardziej reaktywnymi odmianami owsa. Przyszłe badania wyjaśnią, jaki poziom progowy owsa z immunogennymi peptydami glutenu może mieć wpływ na zdrowie celiaków.

Pacjent z celiakią stosuje dietę bezglutenową. Czy istnieje łatwy sposób sprawdzenia, czy robi to prawidłowo?

Do niedawna jedynym sposobem oceny przestrzegania diety bezglutenowej była biopsja, która jest kosztowna, inwazyjna i obrzydliwa, lub test serologiczny, który według kilku badań nie jest wystarczająco dokładny (Kaukinen i in., 2002; Tursi i in., 2003; Moreno i in., 2015; Comino i in., 2016) i często może prowadzić do wyników fałszywie dodatnich lub ujemnych. Po spożyciu glutenu i dotarciu do przewodu pokarmowego jest on rozkładany na mniejsze części, zwane peptydami, a ostatecznie na aminokwasy. Niektóre z tych peptydów (takie jak 33-mer) są odporne na trawienie i pozostają nienaruszone. Przechodzą one przez barierę śluzówkową i u pacjentów z celiakią wywołują reakcję na celiakię. Peptydy te są następnie wydalane zarówno z moczem, jak i kałem, a ich wykrycie w tych dwóch rodzajach próbek jest bezpośrednim dowodem spożycia glutenu. Niedawne badanie z udziałem 188 pacjentów z celiakią wykazało, że około 40% z nich miało wykrywalne poziomy peptydów glutenu w kale. W badaniu tym wykorzystano przeciwciało G12 firmy Hygiena do wykrywania peptydów glutenu.

• "Różnorodność potencjalnej immunogenności owsa: podstawa wyboru odmian owsa bez toksyczności w celiakii". Comino I, Real A, de Lorenzo L, Cornell H, López-Casado MÁ, Barro F, Lorite P, Torres MI, CebollaA, Sousa C. Gut 2011 Jul;60(7):915-22.
• "Charakterystyka molekularna i immunologiczna białek glutenowych wyizolowanych z odmian owsa, które różnią się toksycznością dla celiakii". Real A, Comino I, de Lorenzo L, Merchán F, Gil-Humanes J, Giménez MJ, López-Casado MÁ, Torres MI, Cebolla Á, Sousa C, Barro F, Pistón F. PLoS One 2012;7(12):e48365.
• "Identyfikacja i charakterystyka molekularna peptydów owsa związanych z odpowiedzią immunologiczną celiakii". Comino I, Bernardo D, Bancel E, de Lourdes Moreno M, Sánchez B, Barro F, Šuligoj T, Ciclitira PJ,Cebolla Á, Knight SC, Branlard G, Sousa C. Food Nutr Res. 2016 Feb 5;60:30324.
• "Czułe wykrywanie frakcji zbóż toksycznych dla pacjentów z celiakią przy użyciu przeciwciał monoklonalnych przeciwko głównemu immunogennemu peptydowi pszenicy". Morón B, Cebolla A, Manyani H, Alvarez-Maqueda M, Megías M, Thomas Mdel C, López MC, Sousa C. Food Nutr Res. 2008 Feb;87(2):405-14.
• "W kierunku oceny toksyczności żywności dla pacjentów z celiakią: charakterystyka przeciwciał monoklonalnych dla głównego immunogennego peptydu glutenu". Morón B, Bethune MT, Comino I, Manyani H, Ferragud M, López MC, Cebolla A, Khosla C, Sousa C. PLoS One. 2008 May 28;3(5):e2294. doi: 10.1371.
• "Znaczące różnice w immunotoksyczności odmian jęczmienia w celiakii". Comino I, Real A, Gil-Humanes J, Pistón F, de Lorenzo L, Moreno Mde L, López-Casado MÁ, Lorite P, Cebolla A, Torres MI, Barro F, Sousa C. Mol Nutr Food Res. 2012 Nov;56(11):1697-707.