Anticorpo G12 - Perguntas frequentes

Qual sequência peptídica o anticorpo G12 reconhece?

O anticorpo G12 foi criado contra o peptídeo 33-mer altamente imunotóxico da proteína α-gliadina que induz a doença celíaca (Morón et al., 2008). Mais especificamente, a região de reconhecimento dentro do 33-mer é o epítopo hexamérico QPQLPY. Essa sequência de reconhecimento é repetida três vezes no peptídeo de 33-meros da gliadina. O anticorpo G12 reconhece prolaminas imunotóxicas de trigo, cevada, centeio e também de algumas variedades de aveia (Morón et al., 2008). O anticorpo G12 também é capaz de reagir a outros epítopos encontrados em outras prolaminas tóxicas, como QPQLPF, QPQLPL, QPQQPY, QPQQPF (Morón et al. 2008; e Real et al. 2014).

O anticorpo G12 é reativo apenas ao trímero 33 da α-gliadina?

Não, não é. O anticorpo G12 pode reagir a sequências semelhantes presentes em outras gliadinas (ômega, alfa, gama e beta) e também em gluteninas. O perfil de reconhecimento do G12 foi amplamente caracterizado. (Morón et al., 2008a, Morón et al., 2008b, Real et al., 2014). Há outros peptídeos que podem ser reativos à G12 e que são encontrados em peptídeos imunogênicos de trigo, cevada e centeio: QPQLPY, QPQQPY, QPQQPF, QPQLPF, QPQLPL, QPELPY.

O G12 é capaz de detectar glúten em cervejas e outros materiais hidrolisados?

Em materiais hidrolisados, como cervejas, a proporção relativa de peptídeos reativos para pacientes celíacos pode ser diferente, devido à diversidade das populações de peptídeos resultantes após a fermentação. Em uma publicação de alguns anos atrás (Comino et al., 2012), uma grande variedade de cervejas foi analisada com dois métodos diferentes baseados no anticorpo G12 (ELISA competitivo e imunoensaio de fluxo lateral) com resultados semelhantes. Posteriormente (Real et al., 2014), foi demonstrado que uma cerveja legalmente rotulada como sem glúten (nível indetectável de glúten por ELISA competitivo R5) continha peptídeos de glúten determinados por ELISA G12 e por espectrometria de massa, que identificou peptídeos imunotóxicos para pacientes celíacos. Isso foi demonstrado pela exposição de células do sistema imunológico de pacientes celíacos a esses peptídeos e pela medição de sua resposta. Um estudo mais recente (Picariello et al., 2015) analisou amostras de WeissbIer (cerveja de trigo) e detectou epítopos imunotóxicos com G12. Eles analisaram essas cervejas com soros de pacientes celíacos como fonte de anticorpo antigliadina, confirmando que a cerveja de trigo continha peptídeos com reatividade com soros de pacientes celíacos.

Existem mais de 1.000 peptídeos de glúten conhecidos como imunogênicos. O G12 reconhece todos eles?

Detectar todos esses peptídeos com um único anticorpo é quase impossível. Entretanto, um estudo recente (Moreno et al., 2016) demonstrou que os peptídeos mais imunogênicos (responsáveis por 80 a 95% da imunorreatividade das células T celíacas) reagiram ao G12. Em contraste, um anticorpo amplamente usado na detecção de glúten, o R5, só reconheceu cerca de 25% desses peptídeos imunogênicos de uma cerveja de cevada. A correlação entre a reatividade do G12 e a imunogenicidade das células T foi amplamente estudada em diversos alimentos de difícil análise, como variedades puras de aveia ou cevada (Comino et al., 2011, Comino et al., 2012).

A aveia é segura para pacientes celíacos? Ela é realmente isenta de glúten?

A aveia está frequentemente sujeita à contaminação cruzada (no campo e/ou durante o processo de fabricação). Entretanto, mesmo que a aveia tenha sido cultivada e processada cuidadosamente, isso não significa que ela seja sempre considerada um alimento sem glúten. Um estudo do ano de 2011 (Comino et al., 2011) mostrou que nem todas as aveias são iguais no conteúdo de peptídeos imunogênicos ao glúten. Todas as variedades de aveia contêm avenina, mas cada uma com uma sequência e estrutura diferentes, e apenas algumas dessas variedades podem ser um risco para pacientes celíacos. O glúten das variedades de aveia foi exposto a células de pacientes celíacos e as células responderam adequadamente; elas reagiram apenas às variedades de aveia potencialmente imunotóxicas. Portanto, o anticorpo G12 é a melhor opção para qualquer empresa que trabalhe com aveia sem glúten. Outros estudos (Real et al., 2012; Comino et al.,.2016, Silano et al., 2013) caracterizaram ainda mais as diferenças dessas aveias e sua imunogenicidade. De qualquer forma, o glúten de trigo sempre continha pelo menos 40 vezes mais reatividade ao G12 do que a variedade de aveia mais reativa. Talvez apenas os pacientes celíacos mais sensíveis possam ser afetados pelas variedades de aveia mais reativas. Estudos futuros esclarecerão o nível limite de aveia com peptídeos imunogênicos de glúten para causar impacto na saúde celíaca.

Um paciente celíaco está seguindo uma dieta sem glúten. Existe uma maneira fácil de saber se ele está fazendo isso corretamente?

Até recentemente, a única maneira de avaliar a adesão a uma dieta sem glúten era uma biópsia, que é cara, invasiva e repugnante, ou um teste sorológico, que, de acordo com vários estudos, não é suficientemente preciso (Kaukinen et al., 2002; Tursi et al., 2003; Moreno et al., 2015; Comino et al., 2016) e muitas vezes pode levar a falsos positivos ou negativos. Quando o glúten é ingerido e chega ao trato gastrointestinal, ele é dividido em pedaços menores, chamados peptídeos e, por fim, em aminoácidos. Alguns desses peptídeos (como o 33-mer) são resistentes a essa digestão e permanecem intactos. Eles passam pela barreira mucosa e, em pacientes celíacos, desencadeiam a resposta celíaca. Esses peptídeos são então excretados na urina e nas fezes, e sua detecção nesses dois tipos de amostras é uma evidência direta da ingestão de glúten. Um estudo recente que envolveu 188 pacientes celíacos mostrou que cerca de 40% tinham níveis detectáveis de peptídeos de glúten nas fezes. Esse estudo usou o anticorpo G12 da Hygiena para detectar os peptídeos de glúten.

• "Diversidade na imunogenicidade potencial da aveia: base para a seleção de variedades de aveia sem toxicidade na doença celíaca". Comino I, Real A, de Lorenzo L, Cornell H, López-Casado MÁ, Barro F, Lorite P, Torres MI, CebollaA, Sousa C. Gut 2011 Jul;60(7):915-22.
• "Caracterização molecular e imunológica de proteínas de glúten isoladas de cultivares de aveia que diferem em toxicidade para a doença celíaca". Real A, Comino I, de Lorenzo L, Merchán F, Gil-Humanes J, Giménez MJ, López-Casado MÁ, Torres MI, Cebolla Á, Sousa C, Barro F, Pistón F. PLoS One 2012;7(12):e48365.
• "Identificação e caracterização molecular de peptídeos de aveia implicados na resposta imune celíaca". Comino I, Bernardo D, Bancel E, de Lourdes Moreno M, Sánchez B, Barro F, Šuligoj T, Ciclitira PJ,Cebolla Á, Knight SC, Branlard G, Sousa C. Food Nutr Res. 2016 Feb 5;60:30324.
• "Detecção sensível de frações de cereais que são tóxicas para pacientes com doença celíaca usando anticorpos monoclonais para um peptídeo imunogênico principal do trigo". Morón B, Cebolla A, Manyani H, Alvarez-Maqueda M, Megías M, Thomas Mdel C, López MC, Sousa C. Food Nutr Res. 2008 Feb;87(2):405-14.
• "Toward the assessment of food toxicity for celiac patients: characterization of monoclonal antibodies to a main immunogenic gluten peptide". Morón B, Bethune MT, Comino I, Manyani H, Ferragud M, López MC, Cebolla A, Khosla C, Sousa C. PLoS One. 2008 May 28;3(5):e2294. doi: 10.1371.
• "Diferenças significativas na imunotoxicidade celíaca das variedades de cevada". Comino I, Real A, Gil-Humanes J, Pistón F, de Lorenzo L, Moreno Mde L, López-Casado MÁ, Lorite P, Cebolla A, Torres MI, Barro F, Sousa C. Mol Nutr Food Res. 2012 Nov;56(11):1697-707.