Nowa, sprawdzona metoda wykrywania E. coli O157:H7 w mięsie wołowym

Służba Bezpieczeństwa i Inspekcji Żywności Departamentu Rolnictwa Stanów Zjednoczonych (USDA FSIS) zbiera i analizuje surowe produkty wołowe zarówno pod kątem Escherichia coli wytwarzającej toksynę Shiga (STEC), jak i Salmonelli. Obecne metody mogą być pracochłonne i powodować straty produktu. Zazwyczaj próbka jest pobierana przez wycięcie N60 i poddawana wspólnej analizie na obecność obu patogenów. Przemysł wołowy rutynowo stosuje te same techniki pobierania próbek.

Na czym polega metoda N60?

Metoda ta wymaga losowego pobierania próbek okrawków wołowiny z każdej partii produkcyjnej. Łącznie 60 kawałków z każdej partii należy pobrać aseptycznie, krojąc cienkie paski z zewnętrznej powierzchni kawałków mięsa. Każdy pasek jest następnie nacinany nożem i umieszczany w woreczku do pobierania próbek. Po przygotowaniu wszystkich pasków woreczek powinien ważyć około 325 g. Torebki są następnie wysyłane do laboratorium w celu przeprowadzenia testów. Proces ten jest pracochłonny, stwarza zagrożenie dla bezpieczeństwa pracowników i zwiększa ryzyko zanieczyszczenia krzyżowego (ponieważ próbki mogą być pobierane z wielu barier). Następnie przeprowadzane są testy laboratoryjne, a jeśli uzyskany zostanie pozytywny wynik na obecność E. coli, przeprowadzane są dalsze testy w celu potwierdzenia, czy próbka jest rzeczywiście pozytywna. Testy potwierdzające trwają zwykle od 3 do 4 dni.

A gdyby można było uprościć ten proces?

Uważamy, że zdecydowanie można. Niedawno opracowano nowatorską metodologię pobierania próbek, która wykorzystuje ręczny wacik do pobierania próbek (MSD) zamiast pobierania rzeczywistych porcji mięsa do badania. Wymazówka MSD została zaprojektowana do wychwytywania patogenów z górnej powierzchni całej partii na matrycy z tkaniny. Wymazówka ta zapewnia uproszczone podejście do pobierania próbek mięsa wołowego, które jest nieniszczące i zapewnia oszczędność pracy (zarówno pod względem czasu, jak i bezpieczeństwa). Ten wacik zapewnia uproszczone podejście do pobierania próbek, które jest nieniszczące. W połączeniu z łączeniem próbek po wzbogaceniu, pobieranie próbek powierzchniowych za pomocą wacika MSD może potencjalnie przynieść szybkie i opłacalne wyniki podczas badań przesiewowych za pomocą PCR i zmniejszyć ilość odpadów produktowych.

Jak to zweryfikowaliśmy?

Za pomocą wymazówek MSD ^{MicroTally™} pobrano wymaz z surowego mięsa wołowego, a następnie dodano do niego duże lub małe ilości bakterii E. coli O157:H7 i Salmonella Typhimurium. Równolegle analizowano również niezaszczepione kontrole. Wymazy homogenizowano z 200 ml wstępnie ogrzanego (42°C) podłoża MP i inkubowano w temperaturze 42°C przez 8-24 godziny. Próbki badano metodą Real-Time PCR przy użyciu systemu ^BAX® i potwierdzono zgodnie z procedurami zawartymi w metodach USDA FSIS MLG 5C.00 (STEC) i 4.10 (Salmonella).

Wnioski:

Wyniki wskazują, że metoda ta zapewnia dokładne wyniki wykrywania zarówno E. coli, jak i Salmonella Typhimurium po 8 godzinach, co odpowiada metodzie referencyjnej USDA FSIS. Czułość i swoistość wyniosły 100%. Referencje:

1. Beef Industry Food Safety Council (BIFSCO) Marzec 2020. Wytyczne dotyczące losowania i pobierania próbek produktów wołowych do analizy patogenów. https://www.bifsco.org/Media/BIFSCO/Docs/lotting_and_sampling_of_beef_products_for_pathogens_analysis_update_april_-2019.pdf