qPCR（Real-Time PCR）协议说明

全面介绍定量聚合酶链式反应（qPCR），又称实时 PCR。该技术广泛用于实验室检测和量化 DNA 和 RNA 序列，在基因表达分析和病原体检测等各种应用中发挥着重要作用。

视频中涉及的要点包括

1. qPCR 的原理：该方法扩增特定的 DNA 序列，并使用荧光染料或探针实时测量扩增产物的数量。
2. qPCR 的组成部分：
   • 模板 DNA/RNA：要扩增的目标序列。
   • 引物：启动 DNA 合成的短 DNA 序列。
   • DNA 聚合酶：延长引物以形成新 DNA 链的酶。
   • 荧光探针/染料：与扩增 DNA 结合时会发出荧光的分子，可用于量化。
3. qPCR 工作流程：
   • 样品制备：从样品中提取核酸。
   • 反应设置：混合模板、引物、聚合酶和荧光探针/染料。
   • 热循环：重复变性、退火和延伸循环以扩增目标序列。
   • 数据收集：监测每个循环中的荧光强度，对 DNA 进行量化。
4. 数据分析：
   • 阈值周期（Ct）：荧光超过预定阈值的周期数，与目标核酸的初始量成反比。
   • 定量方法：标准曲线法和比较 Ct 法确定目标序列的数量。

视频强调了正确实验设计的重要性，包括选择适当的对照和参考基因，以确保获得准确可靠的 qPCR 结果。