Vidéo éducative
Explication du protocole qPCR (Real-Time PCR)
Vue d'ensemble de la réaction en chaîne de la polymérase quantitative (qPCR), également connue sous le nom de Real-Time PCR. Cette technique est largement utilisée dans les laboratoires pour détecter et quantifier les séquences d'ADN et d'ARN, et joue un rôle crucial dans diverses applications, notamment l'analyse de l'expression génétique et la détection des agents pathogènes.
Les principaux points abordés dans la vidéo sont les suivants :
- Principe de la qPCR : La méthode amplifie des séquences d'ADN spécifiques et mesure la quantité de produit amplifié en temps réel à l'aide de colorants ou de sondes fluorescents.
- Composants de la qPCR :
- ADN/ARN modèle : La séquence cible à amplifier.
- Amorces : Courtes séquences d'ADN qui initient la synthèse de l'ADN.
- ADN polymérase : Une enzyme qui étend les amorces pour former les nouveaux brins d'ADN.
- Sondes/colorants fluorescents : Molécules qui émettent une fluorescence lorsqu'elles sont liées à l'ADN amplifié, ce qui permet de les quantifier.
- Flux de travail qPCR :
- Préparation de l'échantillon : Extraction des acides nucléiques de l'échantillon.
- Préparation de la réaction : Mélange du modèle, des amorces, de la polymérase et des sondes/dyes fluorescents.
- Cycle thermique : Répétition des cycles de dénaturation, de recuit et d'extension pour amplifier la séquence cible.
- Collecte de données : Contrôle de l'intensité de la fluorescence au cours de chaque cycle pour quantifier l'ADN.
- Analyse des données :
- Cycle seuil (Ct) : Le nombre de cycles auquel la fluorescence dépasse un seuil prédéfini, inversement proportionnel à la quantité initiale d'acide nucléique cible.
- Méthodes de quantification : Courbe standard et méthodes comparatives de Ct pour déterminer la quantité de la séquence cible.
La vidéo souligne l'importance d'une bonne conception expérimentale, y compris la sélection de contrôles et de gènes de référence appropriés, pour garantir des résultats d'EnSURE® précis et fiables.