Explicación del protocolo qPCR (Real-Time PCR)

Una visión general de la Reacción en Cadena de la Polimerasa cuantitativa (qPCR), también conocida como Real-Time PCR. Esta técnica se utiliza ampliamente en los laboratorios para detectar y cuantificar secuencias de ADN y ARN, y desempeña un papel crucial en diversas aplicaciones, como el análisis de la expresión génica y la detección de patógenos.

Los puntos clave tratados en el vídeo incluyen:

1. Principio de la qPCR: El método amplifica secuencias específicas de ADN y mide la cantidad de producto amplificado en tiempo real utilizando tintes o sondas fluorescentes.
2. Componentes de la qPCR:
   • ADN/ARN molde: La secuencia diana que debe amplificarse.
   • Cebadores: Secuencias cortas de ADN que inician la síntesis del ADN.
   • ADN polimerasa: Una enzima que extiende los cebadores para formar las nuevas cadenas de ADN.
   • Sondas/tintes fluorescentes: Moléculas que emiten fluorescencia cuando se unen al ADN amplificado, lo que permite su cuantificación.
3. Flujo de trabajo de la qPCR:
   • Preparación de la muestra: Extracción de ácidos nucleicos de la muestra.
   • Preparación de la reacción: Mezcla de molde, cebadores, polimerasa y sondas/dianas fluorescentes.
   • Ciclado térmico: Repetición de ciclos de desnaturalización, recocido y extensión para amplificar la secuencia diana.
   • Recogida de datos: Monitorización de la intensidad de fluorescencia durante cada ciclo para cuantificar el ADN.
4. Análisis de datos:
   • Ciclo umbral (Ct): El número de ciclo en el que la fluorescencia supera un umbral predefinido, inversamente relacionado con la cantidad inicial de ácido nucleico diana.
   • Métodos de cuantificación: Curva estándar y métodos Ct comparativos para determinar la cantidad de la secuencia diana.

El vídeo hace hincapié en la importancia de un diseño experimental adecuado, incluida la selección de controles y genes de referencia apropiados, para garantizar unos resultados de qPCR precisos y fiables.