Von Experten erklärt: Die 5 wichtigsten Tipps zur Quantifizierung, die Sie kennen sollten

Willkommen zur ersten Serie "Von Experten erklärt" mit MDx Global Product Manager, April Englishbey.

Lassen Sie uns gleich loslegen und etwas über Quantifizierung erfahren.

"Ich bin bei der Quantifizierung mit an Bord und habe die erste Quantifizierungsmethode (oder das Kit) SalQuant™ auf den Markt gebracht und die ganze Zeit über begleitet. Daher wollte ich einige Erfahrungen und Eigenschaften mit Ihnen teilen, auf die Sie als Kunde achten sollten, wenn Sie Ihren Anbieter zur Quantifizierung befragen.

Als jemand, der praktische Erfahrung in der Entwicklung von Quantifizierungsverfahren für die Industrie hat, wollte ich Ihnen die kritischen Komponenten vorstellen, die wir bei der Entwicklung jeglicher Art von Quantifizierungsverfahren berücksichtigen, sowie die Art und Weise, wie diese Verfahren für die Industrie funktionieren, um letztlich das Ziel der Verringerung des Verbraucherrisikos zu erreichen."

Tipp 1

"Nummer eins ist die Flexibilität der Daten. Überlegen Sie bei den Daten, die Sie erfassen und nutzen wollen, was Sie eigentlich wissen wollen. Wenn Sie ein Ergebnis von 5,7 KBE pro Gramm erhalten, wie können Sie das dann als Entscheidungshilfe nutzen? Das ist ein Teil der beratenden Erkundung, die wir mit unseren Kunden durchführen, um herauszufinden, wie Sie die zusätzlichen Informationen nutzen müssen."

Wenn Sie die Antwort auf diese Fragen kennen, können Sie entscheiden, welche der beiden Arten der Quantifizierung Sie benötigen, je nach Flexibilität und Zweck der Daten.

Bei der echten Quantifizierung, wie bei SalQuant, wird ein bestimmter Inkubationszeitpunkt in Verbindung mit einer Software verwendet, um die Anzahl der Bakterien in der ursprünglichen Probe zu bestimmen.
Bei Grenzwerttests wird einfach festgestellt, wenn zu einem bestimmten Zeitpunkt ein positiver Befund auftritt, der anzeigt, dass die Anzahl der Bakterien größer ist als der festgelegte Schwellenwert. Manchmal wird diese Art von Tests auch als Semi-Quantentests bezeichnet, aber Grenzwerte und Schwellentests sind etwas weniger verwirrend.

Es ist wirklich wichtig zu verstehen, nach welcher Art von Daten Sie suchen und wie Sie anhand dieser Daten eine Entscheidung treffen würden! Ist die von Ihnen verwendete Methode flexibel genug, um mit einer einzigen Probe oder einem einzigen Protokoll entweder Quantifizierungs- oder Grenzwerttests durchzuführen?

Tipp 2

"Das zweite Werkzeug sind dynamische Matrixoptionen.

Bei der Lebensmittelsicherheit geht es nicht nur um Endprodukte, auch wenn diese Proben in den meisten Fällen im Mittelpunkt stehen. Aber auch die Verarbeitung und die Vorernte sind Teil der Gleichung, um die es geht, wenn man den gesamten Bereich der Lebensmittelsicherheit verwalten will.

Als wir vor 3 Jahren mit dieser Reise begannen, entwickelten wir zunächst die Quantifizierung für Endprodukte und sammelten großartige Daten, ABER wir mussten immer noch herausfinden, warum die Bakterien nach all den Maßnahmen, die während des Prozesses angewendet wurden, immer noch überlebten.

Wenn wir am vorderen Ende der Tier- und Lebensmittelproduktion aufräumen können, haben wir eine größere Chance, Salmonellen während des gesamten Prozesses zu entfernen und das Risiko zu verringern. Aus diesem Grund können wir beobachten, dass Industrien und Einflussnehmer nicht nur Daten über das Endprodukt sammeln, sondern auch konsistente Datenpunkte in ihren Prozessen hinzufügen und wirklich bewerten, ob die Maßnahmen funktionieren. Wir haben auch weiter zurück zur Farm oder zur Vorernte gearbeitet, um zu messen, wo wir die Belastung mit Salmonellen beeinflussen können, die hereinkommt und was herauskommt."

Wir suchen nach Anbietern, deren Methoden so robust sind, dass sie mit verschiedenen Matrices und sogar mit schmutzigen Proben arbeiten können, wie z.B. Rinsate aus der Aufhängung im Vergleich zu Rinsaten nach der Kühlung - beides sind immer noch Rinsate, aber wir müssen überprüfen, ob die Methode aufgrund der Art der "Verschmutzung" funktioniert.

Nicht alle Proben sind gleich, auch wenn sie ähnlich aussehen. Daher ist es wichtig, dass Sie sich selbst ein Bild von den Daten machen und sicherstellen, dass sie überprüft wurden.

Tipp 3

"Nummer drei ist der größere aufzählbare Bereich.

Die Methoden müssen in der Lage sein, sowohl das untere Ende (1 KBE) als auch das obere Ende (10.000 KBE) des Quantifizierungsbereichs zu erreichen, denn wir brauchen Flexibilität je nach Art der Probe und auch dann, wenn es zu einem kritischen Fehler kommt, bei dem die Bakterien außer Kontrolle geraten."

Im Rahmen von Lebensmittelsicherheitsprogrammen wissen wir, dass es manchmal einen Ausreißer (niedrig oder hoch) gibt und die Methode in der Lage sein muss, diesen zu quantifizieren, anstatt einen negativen oder überzähligen Bereich zu melden, was kein hilfreicher Datenpunkt ist.

"Ich verwende gerne das Beispiel des Spülwassers, wie ich es in Tipp 2 erwähnt habe, um die Prozesskontrolle von schmutzig zu sauber zu machen. Wenn man in der Lage ist, zu quantifizieren, dass vor der Intervention eine hohe Anzahl von Bakterien vorhanden ist und nach der Intervention immer noch ein positives Ergebnis vorliegt, aber in einer sehr geringen Menge, dann ist das wichtig, um die Effektivität des Prozesses und der Interventionen wirklich messen zu können."

Es ist wirklich wichtig zu verstehen, dass man von einem Endprodukt erwartet, dass es möglichst sauber und in den meisten Fällen frei von Krankheitserregern ist. Die Ergebnisse sollten nicht so hoch sein wie 100 KBE/g oder mL. Selbst 10 KBE/g können je nach Branche zu hoch sein. Methoden, deren unterer Grenzwert bei nur 100 KBE/g liegt, sind in einem Endprodukt nicht wirklich hilfreich, da der Benutzer ein falsches Gefühl von "Sauberkeit" bekommt, wenn die Quantifizierung als negativ angesehen wird.

Tipp 4

"Der vierte Tipp ist, dass das Verfahren einfach zu handhaben sein sollte.

Aus regulatorischer Sicht wird die Prävalenz immer eine entscheidende Komponente zur Messung des Verbraucherrisikos sein. Die Quantifizierung soll die Prävalenz nicht vollständig ersetzen. Sie ist eher ein Zusatznutzen. Wenn man über den Prozess nachdenkt, bei dem es darum geht, die gesetzlichen Anforderungen zu erfüllen und gleichzeitig mehr Informationen zu sammeln, ist die Verwendung einer einzigen Probe während des gesamten Prozesses sehr hilfreich, was Zeit und Arbeitsressourcen angeht.

"Die Verwendung einer einzigen Probe ist der Grund, warum wir unsere Protokolle bei Hygiena so gestaltet haben, dass wir einen optimierten Arbeitsablauf haben, bei dem die Probe einmal eingerichtet werden kann, um sowohl Quantifizierungsergebnisse zu erhalten, die mir sagen, ob meine Probe positiv ist und ein hohes Risiko birgt, oder ob sie negativ ist und ich mit der Prävalenz fortfahren muss, um das regulatorische Risiko zu managen. Der Wert der Quantifizierung ist nicht dazu gedacht, die normalen Prozesse zu stören. Wenn Sie mehr Ressourcen und mehr Kosten oder Arbeit hinzufügen, ist das am Ende des Tages wirklich ein zusätzlicher Nutzen? Die Daten sind immer noch sehr wertvoll, aber wenn sie aufgrund des Prozesses so schwer zu beschaffen sind, wird es unerschwinglich. Wir brauchen dynamische Daten, die numerische Daten sind und nicht nur Einsen und Nullen oder positive und negative Werte.

Wenn dies im Labor nicht so einfach möglich ist, könnten sich die Industrie und die Unternehmen darauf zurückziehen, nur ein Minimum an Prävalenz zu erreichen, und das ist nicht der Weg, den wir für die Lebensmittelsicherheit gehen müssen.

Tipp 5

"Der letzte Tipp ist, sich die Daten anzusehen."

Bei jeder Methode ist es wichtig, den Erfolg mit Daten aus Validierungen oder Verifizierungen zu belegen, um sicherzustellen, dass die Anbieter und Entwickler der Methode ihre Sorgfaltspflicht erfüllt haben.

"Das Schöne an der Verwendung der PCR für die Quantifizierung ist, dass die Assays bereits für die Kernkomponente des Erregernachweises bei 1 KBE/Probe für die Prävalenz validiert wurden, was schwieriger ist als die Quantifizierung. Da alle Kriterien für den Einschluss und die Ausschließlichkeit bereits erfüllt sind, fügen wir nur noch die Quantifizierung hinzu, indem wir bereits etablierte mikrobiologische Werkzeuge verwenden."

Sie sollten nicht nur die Daten sehen, sondern auch die Menge der Daten und die Art und Weise, wie sie gesammelt und verglichen wurden, wirklich verstehen. Es reicht nicht aus, nur 10 Proben zu entwickeln oder zu validieren. Mindestens 30 Proben schaffen statistische Relevanz und Vertrauen in die Vergleiche mit Referenzmethoden, aber das ist ein absolutes Minimum.

Lassen Sie uns einpacken

Die Art und Weise, wie wir über Quantifizierung denken, und die Gründe für all diese Fragen und Kommentare, die Sie in der Branche und bei den Behörden hören, sind, dass Sie sich selbst informieren und aufklären müssen.

"Die Verwendung einer einzigen Probe ist der Grund, warum wir unsere Protokolle bei Hygiena so gestaltet haben, dass wir einen optimierten Arbeitsablauf haben, bei dem die Probe einmal eingerichtet werden kann, um sowohl Quantifizierungsergebnisse zu erhalten, die mir sagen, ob meine Probe positiv ist und ein hohes Risiko darstellt, oder ob sie negativ ist und ich mit der Prävalenz fortfahren muss, um das regulatorische Risiko zu managen. Der Wert der Quantifizierung ist nicht dazu gedacht, die normalen Prozesse zu stören. Wenn Sie mehr Ressourcen und mehr Kosten oder Arbeit hinzufügen, ist das am Ende des Tages wirklich ein zusätzlicher Nutzen? Die Daten sind immer noch sehr wertvoll, aber wenn sie aufgrund des Prozesses so schwer zu beschaffen sind, wird es unerschwinglich. Wir brauchen dynamische Daten, die numerische Daten sind und nicht nur Einsen und Nullen oder positive und negative Werte.